

基于CRISPR技术的非病毒模式的细胞治疗开发凭借其成本低,通量高和更安全的特点,逐渐受到更多关注,也为细胞治疗商业化过程中,暴露出来的慢病毒载体短缺导致产能和推广受限问题,提供了解决方案。
金斯瑞推出“非病毒细胞疗法-CRISPR基因敲入优化试剂盒”,试剂盒包含sgRNA,Cas蛋白 ,单链/双链敲入模板,用于验证和优化T细胞,NK细胞,iPSC等细胞基因敲入效率,推进支持基于CRISPR技术敲入CAR,TCR等序列非病毒细胞治疗开发,具有以下优势:
- ✔ 高效的验证优化:含EGFP或GFP报告基团,快速优化实验体系、提升敲入效率
- ✔ 经济快速的测试: 现货快至3个工作日,较之定制试剂节省75%经费
- ✔ 灵活的试剂组合: 可选任意一个或多个组分
- ✔ 序列经优化与验证: 每个批次产品均经过验证,敲入效率高达57%
5月23日-6月25日,欢迎点击下方按钮,免费申领ssDNA或dsDNA现货试用装 (50 μg) + sgRNA现货试用装 (1.5 nmol),两者序列设计对应同一位点,搭配使用测试更高效!敲入序列含GFP或EGFP序列方便检测,单链ssDNA或双链dsDNA / 敲入位点(TRAC或Rab11a) / CTS序列等任选,帮助您验证与优化CRISPR敲入实验体系!
6月26日-6月30日,我们将邮件通知免费试用装客户并寄送,其余客户也将均获得CRISPR基因敲入优化试剂盒6折优惠券1张!
试剂盒组分
化学合成sgRNA
- HPLC纯化的SafeEdit sgRNA
- TRAC、Rab11a敲入位点可选
高纯度Cas9蛋白
- 野生型(WTSpCas9)和增强型(eSpCas9)均可选择
基因敲入(HDR)模板
- 单链ssDNA/共价闭合双链dsDNA敲入模板可选
- 可添加CTS设计提升敲入效率
基因敲入增强剂(Enhancer)*
- iPSC/T细胞等多种细胞,多个位点验证
- 显著提升敲入效率高达2.4倍
* 欢迎咨询基因敲入增强剂(Enhancer),您可以联系技术支持了解详情或订购,邮箱: oligo@genscript.com.cn ,电话:400-025-8686转5812或5815。
试剂盒定制
1. 请选择您需要的目的基因敲入位点:
- TRAC : 适用于T细胞,常用的CAR序列敲入位点,sgRNA针对TRAC位点的第一个外显子区域设计
- Rab11a : 通用的管家基因,适用于T细胞、NK细胞、巨噬细胞、iPSC细胞等具有Rab11a 位点的更广泛的细胞
- 备注 :其他位点请选择 定制化sgRNA 、 基因敲入(HDR)模板合成服务
2. 请选择您需要的基因敲入模板:
- 野生型Cas9蛋白 : 科研级,包含一个核定位信号(NLS)
- 特异性增加型eSpCas9-2NLS蛋白 : 通过在SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A) 两端增加核定位信号(NLS)去提升基因编辑的靶向特异性,更稳定,在提升编辑效率的同时可以降低10倍以上的脱靶效率1
3. 请选择您需要的基因敲入模板:
- GenExact™ ssDNA: 单链模板
- GenWand™ dsDNA: 双端共价封闭双链模板
- GenEaxct™ ssDNA和GenWand™ dsDNA: 推荐同时选择两者,比较选择合适您实验体系的敲入模板类型
4. 您是否需要在您的基因敲入模板上增加CTS序列去提升敲入效率?
(CTS设计提升编辑效率的方案详见文献报告和案例分享
,实验操作详见操作指南)
- 需要 :CTS序列让 RNP(Cas9+sgRNA)结合至敲入模板两端,促进模板进入细胞核,提升敲入效率,单链模板需要配合退火引物使用
- 不需要
试剂盒产品详情
请查收您的定制化试剂盒,按照《金斯瑞的实验操作指南》的推荐试剂剂量,可以用于约12个反应的实验(Lonza 4D电转平台),或用于25个反应的实验(Neon电转平台),您可以根据您的实验体系和试剂用量增减产品数量,确保每个组分的交付量足够支持您开展实验。
货号 | 产品名称 | 数量 |
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KIOK1-1.5
|
SafeEdit TRAC sgRNA - 1.5 nmol | |
KIOK1-3
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SafeEdit TRAC sgRNA - 3 nmol | |
KIOK1-6
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SafeEdit TRAC sgRNA - 6 nmol | |
KIOK2-1.5
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SafeEdit Rab11a sgRNA - 1.5 nmol | |
KIOK2-3
|
SafeEdit Rab11a sgRNA - 3 nmol | |
KIOK2-6
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SafeEdit Rab11a sgRNA - 6 nmol | |
KIOK3-100
|
Ultra eSpCas9 - 100 μg | |
KIOK3-200
|
Ultra eSpCas9 - 200 μg | |
KIOK3-400
|
Ultra eSpCas9 - 400 μg | |
KIOK4-100
|
Ultra WTSpCas9 - 100 μg | |
KIOK4-200
|
Ultra WTSpCas9 - 200 μg | |
KIOK4-400
|
Ultra WTSpCas9 - 400 μg | |
KIOK5
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ssDNA_TRAC_EGFP - 50 μg | |
KIOK6
|
ssDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg | |
KIOK7
|
dsDNA_TRAC_EGFP - 50 μg | |
KIOK8
|
dsDNA_TRAC_EGFP_CTS - 50 μg | |
KIOK9
|
ssDNA_RAB11A_GFP - 50 μg | |
KIOK10
|
ssDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg | |
KIOK11
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dsDNA_RAB11A_GFP - 50 μg | |
KIOK12
|
dsDNA_RAB11A_GFP_CTS - 50 μg | |
KIOK13
|
TRAC CTS Annealing Oligo - 2 nmol | |
KIOK14
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RAB11A CTS Annealing Oligo - 2 nmol |
备注:ssDNA选择含CTS模板必须配套使用对应位点的退火引物,dsDNA本身即为双链无需退火
您可以根据实际需求选择加购以下产品:
货号 | 产品名称 | 数量 |
---|---|---|
KIOK3-100
|
Ultra eSpCas9 - 100 μg | |
KIOK3-200
|
Ultra eSpCas9 - 200 μg | |
KIOK3-400
|
Ultra eSpCas9 - 400 μg | |
KIOK4-100
|
Ultra WTSpCas9 - 100 μg | |
KIOK4-200
|
Ultra WTSpCas9 - 200 μg | |
KIOK4-400
|
Ultra WTSpCas9 - 400 μg |
参考文献
技术资源


常见问题
-
GenExact™ ssDNA
精准敲入、毒性更低的单链模板应用:细胞治疗、KI细胞系/动物模型构建
优势:
- 细胞毒性低,特别适合T细胞编辑
- 精准敲入,脱靶效应低
- 纯度高、经测序验证
规格:
- 敲入序列长度:150-5,000 nt
- µg to mg级交付量
- 科研至GMP级别
-
应用:长基因敲入、工艺放大/规模量产
优势:
- 两端共价封闭、可实现高效精准敲入
- 适合长基因敲入、大规格更经济
- 纯度高、经测序验证
规格:
- 敲入序列长度:2-10 kb
- µg to g级交付量
- 科研至GMP级别
-
应用:替代传统质粒HDR模板,匹配申报合规性
特点:
- 较之传统质粒HDR模板,敲入效率提升高达30%
- 骨架仅429bp,毒性低,转染效率高
- 删除抗性标记与细菌源序列,规避耐药风险与合规性相关风险
- 纯度高、经测序验证
规格:
- 敲入序列长度:1-50 kb
- µg to g级交付量
- GMP级别规划中
UCSF Marson Lab 开发了一种含CTS设计的敲入模板,在两端添加了Cas9蛋白靶向序列(CTS),两端序列中互补的序列通过退火形成了双链DNA。整个HDR模板中,待插入基因左右两侧为同源臂序列,同源臂序列外端为CTS序列,CTS包含PAM序列、gRNA序列和一段边缘核苷酸序列。

通过这种设计,CTS可以让RNP(Cas9+sgRNA)与敲入模板整合在一起进行电转,促进其进入宿主细胞的细胞核,这种设计可以让基因敲入模板更接近RNP的切割位点,从而提升目标基因插入效率。通过添加CTS设计,GMP适用规模的GenExact™ ssDNA 在未添加增强剂的条件下,敲入效率可高达46.2%(图3)。
