His标签蛋白纯化填料

• 表. His标签蛋白纯化选择指南

  产品名称	配基	基质	动态载量	产品编号	应用
  High Affinity Ni-TED Resin FF	TED	6%琼脂糖	10mg/ml	L00885 New	重力柱纯化&仪器纯化，纯度高，化学试剂耐受性更强
  High Affinity Ni-Charged Resin FF	NTA	6%琼脂糖	≥50mg/ml	L00666 Hot	重力柱纯化&仪器纯化，载量很高，纯度很高，性价比高
  Ni-NTA Resin	NTA	4%琼脂糖	>20mg/ml	L00250	重力柱纯化，载量较高，纯度较高
  Ni Resin FF	IDA	6%琼脂糖	>40mg/ml	L00465	重力柱纯化 & 仪器纯化，载量较高，成本较低
  Ni-IDA Resin	IDA	4%琼脂糖	20mg/ml	L00223I	重力柱纯化，载量高，成本很低

• 应用案例1.L00666

  High Affinity Ni-Charged Resin FF（L00666）是一种6%高交联琼脂糖基质，共价偶联螯合剂NTA，通过四个配位键结合Ni2+，高亲和性纯化多组氨酸标记的重组蛋白。High Affinity Ni-Charged Resin FF具有低的Ni2+泄漏，高的蛋白质结合能力和稳定性，并可耐受蛋白质纯化中多种化学试剂。这使得Ni-NTA填料成为了纯化6x His标签融合蛋白的最佳选择。

  1、实验条件

  • 仪器：蠕动泵，玻璃层析柱
  • 样品：Recombinant Protein A in E.coli extract（目的蛋白分子量：34KD）
  • 样品体积：21L大肠杆菌裂解液（菌泥来自70L*2发酵罐）
  • 柱体积：约4.1L（D：200mm；H：13.1cm）
  • 平衡：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min，5倍柱体积
  • 上样：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min
  • 洗杂：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 10-20 mM imidazole, pH 8.0；流速700ml/min，10倍柱体积
  • 洗脱：60 mM NaH₂PO₄, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0；流速500ml/min
  • 溶液置换：透析或超滤至1*PBS溶液中

  2、实验结果

  

  图1. L00666纯化测试SDS-PAGE分析图

  实验结果说明：Ni-NTA纯化载量高，结合力强，纯度高

• 应用案例2.L00885

  High Affinity Ni-TED Resin FF（L00885）是一款新型的固定化金属螯合层析（IMAC）填料，是将TED偶联至6%琼脂糖凝胶介质上，通过五个配位键螯合Ni2+离子。该填料主要用于捕获和纯化分泌到真核表达培养基上清中的组氨酸标签（His-tag）蛋白。与其它螯合剂填料相比，High Affinity Ni-TED resin具有更强的组分兼容性，可以在含有一定浓度的EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白的高效纯化。

  

  实验结果说明：Ni-TED对化学试剂的耐受性强