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杆状病毒-昆虫细胞表达服务

杆状病毒表达系统（Baculovirus Expression Vector System ，BEVS），普遍被认为是一个强大的且通用的表达系统，用来制备大规模的重组蛋白。杆状病毒蛋白表达系统（BEVS）凭借其简易的流程、高表达水平及翻译后修饰功能而被普遍认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。金斯瑞杆状病毒蛋白表达系统包括病毒制备和大规模的蛋白生产，并为制药公司、生物技术公司和学术研究机构提供相应服务。金斯瑞公司早期研究来自被杆状病毒感染的昆虫细胞中的重组蛋白分泌物。同时，我们的大规模地生产能力最高可达500L，并按照客户要求在我们的纯化技术基础上提供功能性测试和生物测试服务。

金斯瑞蛋白表达专家将针对全长cDNAs、EST序列信息和全基因序列信息，就克隆和全长重组蛋白及常用序列的表达与客户进行交流，并提供蛋白表达方面的专业技术支持。

金斯瑞根据Sf9，Sf21，Hi-5及其它昆虫细胞系的密码子偏爱性，免费为您进行密码子优化，有效提高蛋白表达量。您还可以免费使用我们的稀有密码子分析软件，测试您的基因序列是否理想，是否需要优化，以提高您的目的蛋白表达水平。

BacuVance^TM蛋白表达套餐

标准蛋白表达套餐 (SC1258)

金斯瑞标准蛋白表达套餐适用于已有基本表达方案的客户。根据客户的需求，我们将按以下的主要步骤完成表达实验。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	将基因亚克隆至一个表达载体	构建报告	2周
2.重组病毒扩大化培养	重组杆粒DNA扩大化培养重组杆粒转染昆虫细胞 P1病毒贮液（滴定浓度低），P2病毒贮液（滴定浓度高）扩大化培养，确定病毒滴度	5 ml, >107 pfu/ml 病毒	2-3周
3.蛋白表达评估	P2病毒贮液转染昆虫细胞 SDS-PAGE胶电泳及Western blot分析	表达资料	1.5周
4.昆虫细胞表达及纯化	1L昆虫细胞表达体系及纯化一步法纯化	已纯化的蛋白QC报告	1–2周

*注：表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间，如果您还需要额外的服务，可能需适当延长服务时间。

标准蛋白表达套餐 (SC1258)

金斯瑞标准蛋白表达套餐适用于已有基本表达方案的客户。根据客户的需求，我们将按以下的主要步骤完成表达实验。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	将基因亚克隆至一个表达载体	构建报告	2周
2.重组病毒扩大化培养	重组杆粒DNA扩大化培养重组杆粒转染昆虫细胞 P1病毒贮液（滴定浓度低），P2病毒贮液（滴定浓度高）扩大化培养，确定病毒滴度	5 ml, >107 pfu/ml 病毒	2-3周
3.蛋白表达评估	P2病毒贮液转染昆虫细胞 SDS-PAGE胶电泳及Western blot分析	表达资料	1.5周
4.昆虫细胞表达及纯化	1L昆虫细胞表达体系及纯化一步法纯化	已纯化的蛋白QC报告	1–2周

*注：表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间，如果您还需要额外的服务，可能需适当延长服务时间。

BacuVance^TM蛋白表达套餐，将对表达方案进行优化，并经过表达测试，以确立优化后表达方案，再进行大量的蛋白表达及纯化。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	将基因分别亚克隆至三个表达载体中	构建报告	2周
2.病毒扩大化培养	重组杆粒DNA扩大化培养用重组杆粒DNA转染昆虫细胞 P1病毒贮液（滴定浓度低），P2病毒贮液（滴定浓度高）的扩大化培养，P3病毒贮液确定病毒滴度	5 ml, >107 pfu/ml 病毒	3–4周
3.表达优化及少量蛋白制备测试	P3病毒贮液转染昆虫细胞表达优化及MOI, time course, cell lines检测 SDS-PAGE胶电泳及Western blot分析	表达资料	1.5周
4.蛋白表达及纯化	1L昆虫细胞表达体系及纯化一步法纯化	已纯化的蛋白QC报告	1–2周

*注：表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间，如果您还需要额外的服务，可能需要适当延长服务时间。

标准蛋白表达套餐

标准蛋白表达套餐 (SC1258)

金斯瑞标准蛋白表达套餐适用于已有基本表达方案的客户。根据客户的需求，我们将按以下的主要步骤完成表达实验。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	将基因亚克隆至一个表达载体	构建报告	2周
2.重组病毒扩大化培养	重组杆粒DNA扩大化培养重组杆粒转染昆虫细胞 P1病毒贮液（滴定浓度低），P2病毒贮液（滴定浓度高）扩大化培养，确定病毒滴度	5 ml, >107 pfu/ml 病毒	2-3周
3.蛋白表达评估	P2病毒贮液转染昆虫细胞 SDS-PAGE胶电泳及Western blot分析	表达资料	1.5周
4.昆虫细胞表达及纯化	1L昆虫细胞表达体系及纯化一步法纯化	已纯化的蛋白QC报告	1–2周

*注：表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间，如果您还需要额外的服务，可能需适当延长服务时间。

杆状病毒制备服务

金斯瑞重组杆状病毒制备服务确保提供给客户批量的杆状病毒，我们能提供达滴定浓度的高侵染力杆状病毒（可立即使用），以及详细的储存方案。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	将基因亚克隆至一个表达载体	插已入基因的载体	2周
2.病毒繁殖	重组杆粒DNA扩大化培养重组杆粒DNA转染昆虫细胞 P1病毒贮液（滴定浓度低），P2病毒贮液（滴定浓度高）的扩大化培养，确定病毒滴度蛋白表达确认	病毒悬液	2–3周

服务实例

1.表达方案评估以及高分泌表达水平（6 mg/L）

客户的初始要求是合成一段疑似基因，并克隆至我们的杆状病毒载体，做胞内表达。预期的标记蛋白在0.1–1 mg范围内，纯度高于70%。经过详细的序列分析后，我们制定了一个令客户非常赞同的新方案：使用蛋白本身的信号肽促进蛋白分泌表达。结果，我们从0.5 L SF9 CM中获得了3mg的蛋白，且纯度高达80%以上，该蛋白经MALDI-TOF进一步检验得到确认。

Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1–8: Eluted fractions with 1 M NaCl in 20 mM PB, pH 5.0

2.无标签蛋白的纯化

蛋白表达后，培养液经缓冲液透析后，装入SP层析柱中，目的蛋白预测大小为78KDa。SDS-PAGE胶电泳结果显示，12，13，14泳道获得了与预测目的蛋白同样大小的蛋白。

Fig. SDS-PAGE Analysis of target protein purified by SP column
Lane 1: The condition medium
Lane 2–14: Eluted fractions with gradient concentration of NaCl from 0 to 500 mM in 20 mM PB, pH 5.0

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