GMP级别Cas9蛋白
金斯瑞提供RUO级别到GMP级别高编辑效率的Cas9蛋白产品，包括野生型和低脱靶突变型，全力支持客户在新药开发过程中药物研发、临床研究、商业化生产等不同阶段的基因编辑应用。金斯瑞GMP级Cas9蛋白产品严格遵循GMP质量管控及生产指导原则，分析方法符合中美药典要求。严格的工艺和质量控制、完善的可追溯文件体系、以及全面的技术支持，加速您的新药开发及申报进程！
产品特点
*注： 如果您对GMP级别Cas9蛋白产品稳定性数据感兴趣，请联系我们。
产品生产标准
| 检测项 | GMP级别 | RUO级别 |
|---|---|---|
| 厂房设施 | GMP compliant | Non-GMP |
| cGMP 指导原则 | +++ | + |
| ISO 9001质量体系 | / | +++ |
| 质量控制 | +++ | + |
| 文件体系 | +++ | + |
*注： 金斯瑞可以提供在ISO 13485质量体系下定制化Cas9蛋白产品，如有需要请联系我们。
产品放行标准
| 检测项 | GMP级别 | RUO级别 |
|---|---|---|
| 浓度 | 10.0 mg/mL±10% | 10.0 mg/mL±10% |
| 外观 | 澄清，无色液体 | 澄清，无色液体 |
| 纯度（SDS-PAGE） | ≥ 95 % | ≥ 95 % |
| 纯度（SEC-HPLC） | ≥ 95 % | ≥ 90 % |
| 活性 | ≥ 90 % (野生型) | ≥ 90 % (野生型) |
| ≥ 85 % (突变型) | ≥ 85 % (突变型) | |
| 内毒素 | < 10 EU/mg | < 10 EU/mg |
| DNase残留 | ≤ 10 ng/mg | 未检出 |
| RNase残留 | ≤ 1 ng/mg | 未检出 |
| HCP残留 | ＜10 ng/mg | / |
| HCDNA残留 | ≤ 1 ng/mg | / |
| 支原体 | < LOD | / |
| 无菌 | 无菌 | / |
应用案例
图1: 不同级别Cas9蛋白在原代T细胞的TRAC基因敲除实验的基因敲除效率分析。分别使用RUO级别和GMP级别的野生型和突变型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA ，通过电转方式对人原代T细胞进行TRAC基因敲除实验。该结果表明GMP级别的Cas9蛋白在T细胞的TRAC位点敲除实验中，与RUO级别Cas0蛋白产品拥有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均为95%以上。随着开发项目逐渐向临床阶段推进，可以较快的从RUO级别Cas9蛋白产品转换到GMP级别Cas9蛋白产品。
本次实验体系：
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| Cas9蛋白用量 | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩尔比) | 1:2 |
| RNP投入量 | ~25 pmol |
| 细胞数 | 1.0 × 106 |
| 反应体积 | 20 μl |
图2：GMP级别Cas9蛋白在不同规模电转体系中的基因编辑效率分析。使用GMP级别的野生型和突变型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通过电转方式分别在20 μl和100 μl反应体系中对人原代T细胞进行TRAC基因敲除实验。该结果表明GMP级别的Cas9蛋白在两个反应体系中拥有高度一致的基因敲除效率，敲除效率均为95%以上。
本次实验体系：
| 参数 | 数值 | |
|---|---|---|
| 转染体系 | 20 μl | 100 μl |
| Cas9 蛋白用量 | ~4 μg | ~20 μg |
| Cas9: sgRNA (摩尔比) | 1:2 | 1:2 |
| RNP 投入量 | ~25 pmol | ~125 pmol |
| 细胞数 | 1.0 × 106 | 5.0 × 106 |
图3：GMP级别突变型Cas9蛋白在原代T细胞基因编辑效率和脱靶率分析。使用金斯瑞GMP级别的野生型和突变型Cas9蛋白及竞品野生型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通过电转方式在人原代T细胞系中进行TRAC及GM-CSF基因敲除实验。该结果表明金斯瑞提供的GMP级别突变型Cas9与野生型Cas9蛋白在原代T细胞不同靶位点上均有相似的基因敲除效率，并表现出比野生型更低的脱靶效率。
本次实验体系：
| 参数 | 数值 | |
|---|---|---|
| 靶点 | TRAC | GM-CSF |
| Cas9蛋白用量 | ~1.2 μg | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩尔比) | 1:3 | 1:2 |
| RNP投入量 | ~7.5 pmol | ~25 pmol |
| 细胞数 | 2.0 × 105 | 1.0 × 106 |
| 反应体积 | 10 μl | 20 μl |
图4：GMP级别Cas9在原代T细胞中TRAC基因中敲入GFP基因的效率分析。使用GMP级别的野生型和突变型Cas9蛋白，搭配金斯瑞合成的sgRNA，通过电转方式在人原代T细胞TRAC基因位点进行原位敲入实验。该结果表明GMP级别的Cas9蛋白在原代T细胞中有高基因敲入效率。
本次实验体系：
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| Cas9蛋白用量 | ~4 μg |
| Cas9: sgRNA (摩尔比) | 1:2 |
| RNP投入量 | ~25 pmol |
| 细胞数 | 1.0 × 106 |
| HDR Donor | 2 μg |
| 反应体积 | 20 μl |
