利用 Cas9 同源介导修复（HDR）技术，评估 T 细胞中 TRAC 基因位点的 EGFP 敲入效果。向 T 细胞转入靶向 TRAC 位点的 Cas9/gRNA 编辑复合物，同时转入 2 μg 携带 EGFP 片段的线性单链 DNA（ssDNA）供体模板。经 HDR 介导成功整合后，EGFP 可由 TRAC 位点启动表达，因此可在电转完成后通过统计 GFP 阳性细胞占比，评估敲入效率。
| 服务分类 | 长度（nt）* | 交付量* | 周期 | 交付形式 | 价格 |
|---|---|---|---|---|---|
| GenExact lssDNA | 101-5000 | Up to 100mg | 3周起 | 冻干粉（默认） 液体（可选） |
欢迎详询 |
| GenExact cssDNA | 201-4000 | Up to 10mg |
注：可提供反义链，请询价。特殊难度订单需评估周期。
*100nt以下请按照引物合成服务询单或在线订购，其他长度或交付量欢迎详询，邮件发送至oligo@genscript.com.cn或拨打电话400-025-8686转5812/5815，专业技术支持为您服务。
*如需订购lssDNA单次交付量超100mg，或cssDNA单次交付量超10mg，可邮件发送至oligo@genscript.com.cn或拨打电话400-025-8686转5812/5815，专业技术支持为您服务。
利用 Cas9 同源介导修复（HDR）技术，评估 T 细胞中 TRAC 基因位点的 EGFP 敲入效果。向 T 细胞转入靶向 TRAC 位点的 Cas9/gRNA 编辑复合物，同时转入 2 μg 携带 EGFP 片段的线性单链 DNA（ssDNA）供体模板。经 HDR 介导成功整合后，EGFP 可由 TRAC 位点启动表达，因此可在电转完成后通过统计 GFP 阳性细胞占比，评估敲入效率。
金斯瑞已成功交付数百种不同目的基因片段长度的cssDNA，其中包含多种结构复杂、合成难度高的项目。
实验方法
实验以 GenExact™ cssDNA及其他含绿色荧光蛋白（GFP）、同源臂长度为 300 nt的非病毒递送载体作为供体模板，开展 CRISPR 介导的 GFP 序列定点敲入实验，并对比各组基因敲入效率。
实验结论
以 RAB11a 基因位点为研究对象，GenExact™ cssDNA同源介导修复（HDR）基因敲入模板在iPSCs中表现出更优效果：每 50 万 iPSC 转染 1µg 该模板，基因敲入效率可达 53%。已有文献证实，cssDNA作为高效的同源介导修复基因敲入模板，既可实现同一基因位点的多等位基因整合，也适用于不同基因组位点的定点整合。
实验方法
对比不同使用剂量下 GenExact™ cssDNA的基因敲入效率。
实验结论
每 50 万iPSC转染 0.5 µg GenExact™ cssDNA时，基因敲入效率最高，可达 71%。随着模板使用剂量升高，基因敲入效率下降，细胞存活率也随之降低。上述结果表明，低剂量的 cssDNA 模板即可实现高效基因敲入。
合成1,350nt的GenExact™ ssDNA，通过2100分析仪检测纯度高达98.02%
加利福尼亚大学旧金山分校（UCSF）Marson Lab实验结果表明：
Dr. Theodore Roth
The Marson Lab at University of California San Francisco
“在实验室制备长ssDNA序列并不容易，尤其当我们需要较大用量的、用于基因编辑实验时。我们实验室成功的应用金斯瑞ssDNA产品，将大片段的DNA序列敲入了人原代T细胞。”
