CRISPR/Cas9 质粒服务,助力sgRNA表达和基因编辑
金斯瑞提供的CRISPR材料来源于张锋实验室,所提供的CRISPR产品和服务得到美国 Broad 研究所授权许可。包括:
- 已经被MIT设计并验证的sgRNA序列
- 包含all-in-one和Dual 多种类型的载体选择,并可根据需要筛选抗性
- 经MIT验证的空载类型
- 多种Cas9 类型:包含eSpCas9,SpCas9,SpCas9 Nickase,SaCas9和SAM
服务优势
-
特异性sgRNA序列
sgRNA序列由MIT验证 -
全基因组数据库
野生型SpCas9和SAM的人或小鼠的sgRNA序列库 -
及时交付
20,000+条sgRNA隔天交付* -
专业设计工具
可设计多达12个物种的gRNA序列
CRISPR gRNA数据库
金斯瑞提供超20,000 种含有gRNA序列的plentiCRISPRV2质粒,所有sgRNA序列已经被MIT验证。在数据库中,您可通过搜索基因名称,基因标志或ID来查找相关gRNA。
服务 | 表达系统 | 筛选标记 | |
---|---|---|---|
GenCRISPR质粒库 | Lentiviral | Amp, Puro | gRNA 数据库 |
为满足您多种需求,金斯瑞不仅提供多种Cas9类型的定制质粒,也提供经由MIT验证的空载供您选择。
一、定制质粒类型
根据Cas9类型,定制质粒包含如下几种:
-
增强CRISPR/SpCas9质粒 - eSpCas9 New
特异性增强SpCas9 (Enhanced specificity SpCas9, eSpCas9),指的是 SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A),是经过MIT张锋实验室特异性改造的质粒(Slaymaker et al. 2016).eSpCas9可以降低脱靶效率,比自然SpCas9脱靶效率降低10倍之多,同时可实现基因高效编辑。
Cas9基因组编辑依赖于DNA双链的分离。sgRNA与非靶向DNA序列的不匹配可能导致非特异性结合和分裂。为了提高基因组编辑的特异性,科学家开发了突变为K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶链沟槽内中和这些带正电荷的残基,既可以减少非靶结合,也可以刺激靶向结合,这一操作需要更严格的Watson-Crick碱基配对。
服务 表达系统 筛选标记 eSpCas9质粒 Plasmid
LentiviralPuro
GFP获取报价 -
SpCas9质粒 Hot
Cas9内切酶是基因编辑的研究标准。当与单导RNA (single guide RNA,sgRNA)序列结合时,这些酶在基因组中产生位点特异性双链断裂(double strand breaks, DSBs)。
- SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达,也可以在dual载体中单独表达。
- 优选的靶上SpCas9 PAM序列为NGG。
- SpCas9还包含NGA序列的目标亲和力。
服务 表达系统 筛选标记 SpCas9 Plasmids Plasmid
Lentiviral AAVAmp
Amp, Puro
Amp, Neo
Amp, GFP获取报价 -
SpCas9 Nickase质粒
SpCas9 nickase (Cas9n D10A)包含一个突变,不同于SpCas9切割时形成DSB, SpCas9 nickase在切割序列时形成单链缺口。经过SpCas9 nickase切割后,两个相对的gRNA序列可以有效配对,因为这种方法可以避免不必要的插入。
服务 表达系统 筛选标记 SpCas9 Nickase Plasmids Plasmid
LentiviralAmp
Amp, Puro
Amp, GFP获取报价 -
SaCas9质粒
黄色葡萄球菌Cas9同源体(Staphylococcus aureus Cas9 orthologue,SaCas9)是腺相关病毒(adeno-associated virus (AAV AAV)应用的理想内切酶。SaCas9比SpCas9大约短1kb,这允许了在AAV组装时更加灵活。AAV载体较低的免疫原性,使SaCas9非常适合于体内编辑的。
- 优选的靶SaCas9 PAM序列为NNGRRT。
- SaCas9 对NNGRRN也有很高的亲和性。
服务 表达系统 筛选标记 SaCas9 plasmids AAV Amp 获取报价 -
转录激活(Transcription Activation, SAM)质粒
CRISPR/Cas9协同激活介质(SAM)系统已被设计用于激活下游目标的转录。SAM系统使用三种不同的激活因子,VP64、P65和HSF1,它们被组装到催化失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)复合物上驱动转录。
- SAM复合物由三个组分组成:一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合蛋白,和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
- SAM系统能够激活编码和非编码的元素。
- 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列,请前往gRNA数据库。
二、空载服务
为满足您的科研需要,金斯瑞提供空载服务,载体序列已经由MIT验证。这些载体包含一个17bp-1.8kb的可表达连接体,以代替定制的sgRNA序列,您可根据需要对其进行修改。
SpCas9 载体
Cas9内切酶来源于II型CRISPR系统。化脓性链球菌(SpCas9)是第一个为哺乳动物基因组编辑Cas9酶。当与gRNA 序列结合后,这些酶可以在特定位点上进行基因组双链断裂。因其简捷性,特异性以及高效性,CRISPR / Cas9系统在基因组编辑中广泛使用,金斯瑞提供Broad研究所验证的 WT SpCas9可用于哺乳动物基因组编辑。 WT SpCas9的交付载体有两种形式, All-in-one 和Dual 类型,可用于非病毒性,慢病毒型lenti-viral ,以及腺相关病毒(AAV)的转染。其中,慢病毒类型兼容第二代和第三代慢病毒包装质粒。
SpCas9 Nickase载体
虽然CRISPR / Cas9技术与其他基因编辑技术相比是比较明确的,但是脱靶仍然是一个难题。为了提高特异性,科学家们对Cas9核酸内切酶进行了修改。WT Cas9有两个催化域, RuvC 和 HNH,在这些域中进行催化残基突变(特别是RuvC D10A和HNH H840A),形成单链缺口与双链断裂(Ran et al, 2013)。这些Nickase Cas9酶,或Cas9n,由gRNA 引导至靶基因组DNA的另一端。细胞将通过HDR优先修复这些SSBs而不是NHEJ。通过HDR机制可以将降低脱靶效应。金斯瑞为您提供Broad研究所验证的Nickase Cas9助力您在哺乳动物细胞里的基因编辑。

SaCas9 载体
从金黄色葡萄球菌或SaCas9中提取的Cas9同源物与SpCas9具有相似的效率;然而,SaCas9长度比SpCas9大约小于1kb。SaCas9的主要优势是腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)包装:AAV的载体大小约为4.5kb,因此将SpCas9与AAV包装在一起可能具有挑战性(Ran et al., 2015)。相对较小的SaCas9利用AAV载体进行CRISPR基因编辑成为可能。考虑到这一结构的免疫原性较低,因此SaCas9更适合于体内编辑应用,如用于治疗。
Transcription Activation (SAM) 载体
CRISPR/Cas9 Synergistic Activation Mediator (SAM) )是一种蛋白质复合物,可增强内源性基因(一次一个基因,或同一细胞中同时有多达10个基因)的转录。SAM利用Cas9核酸酶的特异性和易用性,通过gRNA将Cas9核酸酶定位于内源性基因组的特定位点。Genscript与Broad Institute*签订了许可协议,提供经过验证的SAM gRNA序列,可针对人类基因组中的任何编码区域,并为任何其他物种提供免费的SAM gRNA设计服务。
SAM复合体由三个组件组成
- 剪切失活的dCas9-VP64融合蛋白:使用dCas9确保内源性基因组中没有链断裂;VP64是一个转录激活域,与p65和HSF1协同作用,增强转录。
- 一个包含两个MS2 RNA适配体的sgRNA:sgRNA的设计目标应该是转录起始位点上游的前200个bp,以便针对SAM复合物进行理想的转录激活。虽然sgRNA通常与Cas9结合,但需要MS2 RNA适配体才能使SAM复合体的第三个成员与Cas9-sgRNA复合物结合。
- MS2-P65-HSF1激活辅助蛋白:包含两个转录激活域P65和HSF1,与VP64协同作用,强力激活下游编码区域的转录。MS2结构域允许其辅助蛋白与sgRNA-dCas9复合物结合。
CRISPR 载体规格
服务 | 载体 | Cas9/gRNA 表达系统 | 交付类型 | 载体类型 | 筛选标记 |
---|---|---|---|---|---|
eSpCas9 Plasmids | eSpCas9-2A- GFP (PX458) New! | eSpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
eSpCas9 Plasmids | eSpCas9-2A- Puro (PX459) V2.0 New! | eSpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
eSpCas9 Plasmids | eSpCas9-LentiCRISPR v2 New! | eSpCas9 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
SpCas9 Plasmids | pSpCas9 BB-2A-GFP PX458 | SpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
SpCas9 Plasmids | pSpCas9 BB-2A-Puro (PX459) v2.0 | SpCas9 & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
SpCas9 Plasmids | pLentiCRISPR v2 | SpCas9 & gRNA | Lentiviral | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
SpCas9 Plasmids SpCas9 Nickase Plasmids |
pLentiGuide-Puro | gRNA Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR PuroR |
SpCas9 Plasmids | pLentiCas9-Blast | SpCas9 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
SpCas9 Plasmids | pLentiCas9-EGFP | SpCas9 Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR EGFP |
SpCas9 Plasmids | pGS-gRNA | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR |
SpCas9 Plasmids | pGS-gRNA-Neo | gRNA Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR NeoR |
SpCas9 Plasmids | pSpCas9 PX165 | SpCas9 Only | Plasmid | Dual Vector | AmpR |
SpCas9 Plasmids | pAAV_SpGuide acceptor (PX552) | gRNA Only | AAV | Dual Vector | AmpR EGFP |
SpCas9 Plasmids | pAAV-SpCas9 PX551 | SpCas9 Only | AAV | Dual Vector | AmpR |
SpCas9 Nickase Plasmids | pSpCas9n BB PX460 | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR |
SpCas9 Nickase Plasmids | pSpCas9n BB-2A-GFP PX461 | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR EGFP |
SpCas9 Nickase Plasmids | pSpCas9n BB-2A-Puro (PX462) V2.0 | SpCas9 Nickase & gRNA | Plasmid | All-in-one Vector | AmpR PuroR |
SpCas9 Nickase Plasmids | pLentiCas9n-Blast | SpCas9 Nickase Only | Lentiviral | Dual Vector | AmpR BsdR BleoR |
SaCas9 Plasmids | pX601_AAV | SaCas9 & gRNA | AAV | All-in-one Vector | AmpR |
Transcription Activation (SAM) | pSgRNA(MS2) | gRNA Only | Plasmid | SAM Multi Vector | AmpR |
Transcription Activation (SAM) | pLenti_sgRNA(MS2)_zeo | gRNA Only | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR ZeoR BeloR |
Transcription Activation (SAM) | pLenti_dCas9-VP64_Blast | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR BlastR BleoR |
Transcription Activation (SAM) | pLenti_dCas9-VP64_GFP | Cas9 Activator | Lentiviral | SAM Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
Transcription Activation (SAM) | pLenti_MS2-P65-HSF1_Hygro | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR HygroR BleoR |
Transcription Activation (SAM) | pLenti_MS2-P65-HSF1_GFP | Activator Adapter | Lentiviral | Multi Vector | AmpR EGFP BleoR |
- CRISPR手册: CRISPR/Cas9 基因编辑的综合性指南
- CRISPR RNP使用指南:如何在基因编辑中使用CRISPR RNP
- 常见问题
- 案例分享
如果对于CRISPR 质粒有任何问题或建议,请联系金斯瑞专业技术支持人员。