CRISPR/Cas9 质粒服务，助力sgRNA表达和基因编辑

CRISPR gRNA数据库

金斯瑞提供超20,000 种含有gRNA序列的plentiCRISPRV2质粒，所有sgRNA序列已经被MIT验证。在数据库中，您可通过搜索基因名称，基因标志或ID来查找相关gRNA。

为满足您多种需求，金斯瑞不仅提供多种Cas9类型的定制质粒，也提供经由MIT验证的空载供您选择。

一、定制质粒类型

根据Cas9类型，定制质粒包含如下几种：

1. 增强CRISPR/SpCas9质粒 - eSpCas9 ^New

   特异性增强SpCas9 (Enhanced specificity SpCas9, eSpCas9)，指的是 SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A)，是经过MIT张锋实验室特异性改造的质粒(Slaymaker et al. 2016).eSpCas9可以降低脱靶效率，比自然SpCas9脱靶效率降低10倍之多，同时可实现基因高效编辑。

   Cas9基因组编辑依赖于DNA双链的分离。sgRNA与非靶向DNA序列的不匹配可能导致非特异性结合和分裂。为了提高基因组编辑的特异性，科学家开发了突变为K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶链沟槽内中和这些带正电荷的残基，既可以减少非靶结合，也可以刺激靶向结合，这一操作需要更严格的Watson-Crick碱基配对。

   服务	表达系统	筛选标记
   eSpCas9质粒	Plasmid Lentiviral	Puro GFP	获取报价

2. SpCas9质粒 ^Hot

   Cas9内切酶是基因编辑的研究标准。当与单导RNA (single guide RNA,sgRNA)序列结合时，这些酶在基因组中产生位点特异性双链断裂(double strand breaks, DSBs)。

   • SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one载体中表达，也可以在dual载体中单独表达。
   • 优选的靶上SpCas9 PAM序列为NGG。
   • SpCas9还包含NGA序列的目标亲和力。

   服务	表达系统	筛选标记
   SpCas9 Plasmids	Plasmid Lentiviral AAV	Amp Amp, Puro Amp, Neo Amp, GFP	获取报价

3. SpCas9 Nickase质粒

   SpCas9 nickase (Cas9n D10A)包含一个突变，不同于SpCas9切割时形成DSB， SpCas9 nickase在切割序列时形成单链缺口。经过SpCas9 nickase切割后，两个相对的gRNA序列可以有效配对，因为这种方法可以避免不必要的插入。

   服务	表达系统	筛选标记
   SpCas9 Nickase Plasmids	Plasmid Lentiviral	Amp Amp, Puro Amp, GFP	获取报价

4. SaCas9质粒

   黄色葡萄球菌Cas9同源体(Staphylococcus aureus Cas9 orthologue,SaCas9)是腺相关病毒(adeno-associated virus (AAV AAV)应用的理想内切酶。SaCas9比SpCas9大约短1kb，这允许了在AAV组装时更加灵活。AAV载体较低的免疫原性，使SaCas9非常适合于体内编辑的。

   • 优选的靶SaCas9 PAM序列为NNGRRT。
   • SaCas9 对NNGRRN也有很高的亲和性。

   服务	表达系统	筛选标记
   SaCas9 plasmids	AAV	Amp	获取报价

5. 转录激活（Transcription Activation, SAM)质粒

   CRISPR/Cas9协同激活介质(SAM)系统已被设计用于激活下游目标的转录。SAM系统使用三种不同的激活因子，VP64、P65和HSF1，它们被组装到催化失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)复合物上驱动转录。

   • SAM复合物由三个组分组成:一个由两个MS2 RNA适配体组成的gRNA、一个催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一个MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
   • SAM系统能够激活编码和非编码的元素。
   • 查找经由MIT验证的SAM gRNA序列，请前往gRNA数据库。

   服务	表达系统	筛选标记
   SAM gRNA Plasmids	Plasmid Lentiviral	Amp Amp, Zeo	获取报价
   SAM dCas9-VP64 Plasmids	Lentiviral	Amp, Blast Amp, GFP	获取报价
   SAM MS2-P65-HSF1 Plasmids	Lentiviral	Amp, GFP Amp, Hygro	获取报价

二、空载服务

为满足您的科研需要，金斯瑞提供空载服务，载体序列已经由MIT验证。这些载体包含一个17bp-1.8kb的可表达连接体，以代替定制的sgRNA序列，您可根据需要对其进行修改。