通用问题

重组蛋白质相关

  • 1. 贵公司提供哪些类型的重组蛋白?以何种格式提供?

    GenScript提供的大多数重组蛋白是细胞因子、生长因子和趋化因子。我们还在不断扩大重组蛋白的范围,包括神经营养素、病毒抗原和酶。GenScript提供的重组蛋白均为无菌、冻干、无载体的分装形式,并配有相应的缓冲液。我们的重组蛋白不添加任何额外的蛋白质或防腐剂。

  • 2. 如何生产重组蛋白?真核表达(酵母、昆虫和哺乳动物细胞)与大肠杆菌表达相比有什么优势?

    我们的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的,分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。

    • 真核生物本身很少分泌原生蛋白,但却能分泌重组蛋白。因此,真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行,然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。
    • 真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理,因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。
    • 真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁,因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素(脂多糖)。
  • 3. 当我打开小瓶时,什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质?

    打开小瓶之前要先离心!我们的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的,因此几微克的产品可能不太明显。我们建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心 20-30秒,以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。我们的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。

  • 4. 如何复溶冻干粉?重组蛋白复溶可接受的体积是多少?重组蛋白复溶后的浓度是多少?

    请查阅您的货物中包含的COA,以了解复溶方法,因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说,我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中,轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。

    重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如,如果在100µL载体蛋白溶液中复溶10µg重组蛋白,则浓度为10µg/100µL或100µg/mL。

  • 5. 如何储存重组蛋白?重组蛋白的保质期多长?

    若要长期保存,蛋白溶液应与载体蛋白(如0.1% BSA或0.1% HSA)一起以等分的形式保存,并在-20°C下冷冻保存。请注意,每次冷冻/解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非COA上另有说明,大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照COA上的规定在最佳储存条件下保存。

  • 6. 什么是载体蛋白?

    载体蛋白(如HSA或BSA)用于提高重组蛋白的稳定性,避免产品粘附在瓶壁上。

  • 7. 如何确定重组蛋白的量?为什么我的检测结果与你们的结果不同?

    我们通过BCA、SDS-PAGE、HPLC和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法,有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体,从而在复溶和离心后造成损失。

  • 8. 为什么有些蛋白质融合了标签?蛋白质标签会影响蛋白质活性吗?

    金斯瑞大多数重组蛋白产品都是无标签的, 不过蛋白的标签可用于多种不同的应用。

    • 蛋白标签可用于蛋白质纯化。
    • 当没有特定抗体时,标签用于蛋白质印迹或 ELISA 中的蛋白质检测。
    • Fc标签可稳定分子,可能会延长连接产物的半衰期。 由于Fc片段倾向于二聚化,因此它有助于将连接的蛋白(特别是受体)形成具有生物活性的二聚体。

蛋白质标签可能会也可能不会影响蛋白质的活性。在某些应用中,小标签(如 His-tag)可能不会影响蛋白质的活性,因此无需去除。例如,蛋白质数据库中有100多种His标签蛋白的结构。这表明,小的His标记通常不会干扰蛋白质的正确折叠。此外,我们的蛋白质网页上还列出了测试的活性结果。如果您担心标签会干扰蛋白质活性,而网上又没有活性数据,请随时通过product@genscript.com.cn与我们联系,获取最新信息。

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