Anti-AAV抗体

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金斯瑞开发了两种不同类型的Anti-AAV抗体。
第一种Anti-AAV抗体可识别特定AAV病毒颗粒构象表位，适用于Dot blot快速检测病毒载体表达水平和Sandwich ELISA定量分析AAV物理滴度。

我们提供经过预验证的即用型抗体对，方便您的研究。

第二种Anti-AAV抗体可识别三种 AAV 衣壳蛋白 VP1、VP2 和 VP3 的线性表位。这类抗体适用于Western Blot分析，可用于评估 AAV 生产中 VP1/VP2/VP3 的表达水平，或鉴定 AAV 生产和纯化过程中衣壳蛋白的存在。

产品应用

• 衣壳蛋白VP1, VP2, VP3鉴定

  AAV 衣壳由三种衣壳蛋白VP1、VP2 和 VP3 以 1:1:10 的比例总共 60 个拷贝组成。 VP1、VP2、VP3的表观分子量分别为87kDa、73kDa、62kDa。衣壳蛋白对细胞转导效率至关重要。 VP2和VP3不足被认为是无效包装的主要原因。过量的 VP3 可能会降低转导效率。三种衣壳蛋白比例的优化在 AAV 生产过程中至关重要。聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 和蛋白质印迹 (WB) 是在重组 AAV 生产过程的初始优化和质量控制过程中检测 VP1、VP2 和 VP3 蛋白组成的有效方法。 GenScript 提供Anti-AAV 抗体用于表征衣壳蛋白 VP1、VP2 和 VP3（图 1 和 2）。

  

  Figure 1. VP1, VP2, VP3 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot
  
  

  Western blot analysis of VP1, VP2, VP3 proteins of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab™ AAVX VP1/VP2/VP3 Antibody (5G4), mAb, Rabbit (GenScript, A02206, 0.1 µg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG.
  
  

  Predicted Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa
  Observed Size for VP1, VP2 and VP3: 87, 72 and 62 kDa

  

  Figure 2. VP1 protein Analysis of AAV Capsids by Western blot
  
  

  Western blot analysis of VP1 protein of AAV type 1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ and rh.1 was conducted using MonoRab™ AAVX VP1 Antibody (24F5), mAb, Rabbit (GenScript, A02207, 0.1 µg/mL). The signal was developed with Peroxidase Conjugated Goat Anti-Rabbit IgG.
  
  

  Predicted Size: 87 kDa
  Observed Size: 87 kDa

• 物理病毒滴度定量检测

  三质粒转染HEK293细胞系统是生产rAAV的常用方法。病毒颗粒滴度（物理滴度）的检测在rAAV生产过程中很重要，下图展示了用Anti-AAV抗体定量检测AAV滴度的原理（图3）。金斯瑞提供多种Anti-AAV 抗体用于 AAV 物理滴度的定量（图 4 和 5）。

  

  Figure 3. Principle of AAV titer quantitation with AAV antibody

  

  Figure 4. Standard Curve of AAV2 Capsids by Sandwich ELISA
  
  

  The Sandwich ELISA assay was developed by Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4), mAb, Mouse (GenScript, A02159-40; 2 μg/mL) and Anti-AAV2 (intact particle) Antibody (2C4) [Biotin], mAb, Mouse (GenScript, A02160-40; 2 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

  

  Figure 5. Standard curve of AAV8 by Sandwich ELISA
  
  

  The AAV8 Sandwich ELISA assay was developed by using MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204; 2.5 μg/mL) and MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (72E8), mAb, Rabbit (GenScript, A02205; 1 μg/mL) as the capture and detection antibody, respectively.

• 免疫原性分析

  人体内的抗AAV抗体可经由野生型AAV病毒感染产生，这些预先存在的抗AAV抗体可能会给基因治疗带来潜在的安全风险，因此有必要彻底地表征rAAV 产品免疫原性。抗药物抗体 (ADA) 检测是测量预先存在的抗AAV 抗体的关键工具，图 6 描述了一种抗 AAV 抗体检测的形式。金斯瑞的Anti-AAV 抗体可用作免疫原性分析的阳性对照或在 ADA 分析中制备标准曲线（图 7 和 8）。

  

  Figure 6. Anti-AAV antibody assay format

  

  Figure 7. Standard Curve of AAV2 Capsids by Indirect ELISA
  
  

  ELISA binding of MonoRab™ AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) with AAV2.
  Coating antigen: AAV2, 1 µg/mL.
  MonoRab™ AAV2 (intact particle) Antibody (33G5), mAb, Rabbit (GenScript, A02203) dilution start from 1,000 ng/mL.

  

  Figure 8. Standard Curve of AAV8 Capsids by Indirect ELISA
  
  

  ELISA binding of MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) with AAV type 8.
  Coating antigen: AAV type 8, 1 µg/mL.
  MonoRab™ AAV8 (intact particle) Antibody (75F2), mAb, Rabbit (GenScript, A02204) dilution start from 1,000 ng/mL.

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