≥ 1E+8 TU/mL
功能滴度保证
实际交付水平
稳定超出承诺标准的3倍
>10 kb大片段基因
滴度提升可达400%
针对大插入片段
定制的高效慢病毒包装平台
100%精准交付
功能滴度
采用Duplex qPCR检测作
为标准质检流程
7个工作日
完成慢病毒包装
14 个自然日
实现基因到病毒全流程
| 规格 | 推荐应用 | 保证交付滴度 | 体积 | 交付周期 | 默认质控 | 交付物 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 纯化慢病毒 | 体外培养细胞转导 | >1E+8 TU/mL | 0.1 mL | 7个自然日起 |
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| 1 mL | ||||||
| 5 mL | ||||||
| >1E+9 TU/mL | 1 mL | |||||
| 病毒上清液 | >2E+6 TU/mL | 0.2 mL | 7个自然日起 |
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*注释：
Duplex qPCR: 可直接检测并定量具有感染能力的病毒颗粒，提供精准的功能性滴度结果。
P24 ELISA: 检测病毒衣壳蛋白，计算出病毒颗粒总数（物理滴度）。依据 P24 滴度公式换算得到的功能性滴度 (TU/mL) 仅为预测值，可能与实际功能性滴度存在差异。
| 明场 | 荧光场 | |
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阳性对照 MOI = 2（qPCR 滴度测定） |
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样品1 5’ LTR to 3’ LTR: ＞9 kb Duplex qPCR 功能滴度：2.52×10⁸ TU/mL MOI = 1.5（qPCR 滴度测定） |
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样品2 5’ LTR to 3’ LTR: ＞9 kb Duplex qPCR 功能滴度： 2.06×10⁸ TU/mL MOI = 1.5（qPCR 滴度测定） |
技术难点：原代细胞（例如PBMC）转导难度大，且根据下游应用需求，需要用低 MOI 进行转导，对病毒要求高。
解决方案：利用金斯瑞专利慢病毒包装平台及 pGS-LVV 转运质粒，保证交付高功能滴度慢病毒载体。
慢病毒载体： pGS-LVV-EF1a-CD19CAR-T2A-EGFP
结果：交付功能滴度为 7.07×10⁹ TU/mL 的慢病毒。用慢病毒转导Human PBMC细胞，成功表达抗 CD19 CAR。MOI＝1时，转导效率＞70%。
| 样品名称 | 阳性细胞比例 (EGFP+/CD19CAR+) |
|---|---|
| Non-transduced | 0.0% |
| MOI=1 | 72.6% |
| MOI=2 | 69.0% |
| MOI=5 | 73.0% |
| MOI=10 | 71.5% |
挑战：插入片段过大（LTR间>10 kb）会降低慢病毒的包装效率，导致病毒滴度偏低并影响下游实验表现。
解决方案：通过采用金斯瑞自主研发的慢病毒包装系统，我们针对 >6.5 kb 大片段插入 优化了病毒包装流程的各个环节，实现了高滴度的病毒制备。
| 明场 | 荧光场 | |
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阳性对照 5’ LTR to 3’ LTR：6,570 bp MOI = 2（qPCR 滴度测定） 时间: 转导后48h |
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样品1 5’ LTR to 3’ LTR：11,288 bp Duplex qPCR功能滴度：1.03×108 TU/mL MOI = 2（qPCR 滴度测定） 时间: 转导后48h |
技术难点：Cas9和gRNA同时递送，插入序列长，慢病毒包装难度大。靶标细胞转导困难，对慢病毒的滴度要求高。
解决方案：利用金斯瑞专利慢病毒包装平台，保证交付大插入片段高功能滴度慢病毒载体。
结果：交付功能滴度>1×109 TU/mL的Cas9+gRNA慢病毒，成功构建稳定细胞池，基因敲除效率＞90%。
Western Blot检测验证敲除效率
技术难点：多跨膜蛋白由于折叠过程复杂、膜整合难度高，通常难以在细胞表面实现有效表达。
解决方案：采用 pGS-LVV-CAG-T-hPGK-PuroR 包装高效转导的慢病毒载体，在 MOI 为 5 和 10 的条件下高效转导 HEK293T 细胞。
结果：该策略在未进行富集的情况下，慢病毒载体介导的基因转移实现了 T（12 次跨膜）蛋白 100% 的阳性表达，且超过 100 倍。结果表明，病毒递送方式能够实现高效转导，并显著提升难表达多跨膜靶点的表达水平。
