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蛋白QC

蛋白运输和保存

慢病毒包装问题

  • 金斯瑞提供慢病毒包装的过程是怎样的,以及QC检测有哪几项:

    plenti载体构建---plenti质粒与辅助质粒共转293T细胞----上清收集---病毒纯化、浓缩---滴度测定,支原体检测。

    QC检测包括:病毒滴度p24 ELISA 检测,支原体Lonza 180检测。

  • 金斯瑞提供慢病毒的包装使用的载体与细胞系是什么,是否可以提供给客户?

    金斯瑞使用慢病毒包装的质粒为plenti系列的质粒,包括单质粒系统与双质粒系统,可以根据客户的需求进行选择,但是有专利限制,目前还不是IPfree状态,因此不能交付plenti系列的质粒,但是可以交付带有客户目的序列的克隆载体(pUC57)。如果客户希望自己提供质粒,由金斯瑞提供病毒包装服务,可以让客户提供载体的全序列,提交给项目经理进行评估。

      单质粒系统 双质粒系统
    Cloning vector Cloning vector Co-delivered vector
    病毒载体 pLentiCRISPR v2 pLentiGuide-Puro pLentiCas9-Blast
    pLentiCas9-EGFP
    plentiCas9n(D10A)-Blast
    lenti sgRNA(MS2)_zeo Lenti dCAS-VP64_Blast
    Lenti MS2-P65-HSF1_Hygro
    Lenti dCAS9-VP64 GFP
    Lenti MS2-P65-HSF1_GFP
    pX601 (AAV) pAAV SpCas9 acceptor (PX552) pAAV-SpCas9 (PX551)
    1. 只需一步感染细胞
    2. 细胞系构建周期短,可用于原代细胞系,iPS等
    1. 需要两步感染细胞,先构建稳定表达Cas9的细胞系
  • 金斯瑞使用什么方法检测慢病毒的滴度。

    金斯瑞使用P24 ELISA的方法测定慢病毒滴度。p24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白,一个慢病毒颗粒(Lentiviral Particle, LP)中约有2000个p24蛋白分子,通过ELISA方法检测P24蛋白分子含量以确定病毒的滴度。该方法检测病毒滴度的稳定性要高于qRT-PCR。

  • 慢病毒保证服务,可以承接的客户目的基因的大小与价格体系。

    慢病毒载体可容纳<4kb的目的基因。
    生产提供的交付结果以及如果包装失败的解决方式:
    Gene Length<1500bp,金斯瑞保证至少107IFU/ml, 低于107IFU/ml则免费重新包装一次,并以最高滴度发货,费用按照实际滴度对应价格收取。若两次都低于107IFU/ml,则不收取包装费。 1500pb≤Gene Length<3000bp,金斯瑞保证至少107IFU/ml , 低于107IFU/ml则免费重新包装一次,并以最高低度发货,费用按照实际滴度对应价格收取 。若两次都低于107IFU/ml ,则只收取订单价格50% 费用。
    3000 pb≤Gene Length<4000bp,金斯瑞保证至少106IFU/ml , 低于106IFU/ml则免费重新包装一次,并以最高滴度发货,费用按照实际滴度对应价格收取 。若两次都低于106IFU/ml ,则只收取订单价格50% 费用。

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