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金斯瑞质粒制备QC方案

质粒制备QC项目详解

金斯瑞质粒制备系列服务默认提供7项以上QC检测，旨在为客户提供高质量，高标准的质粒。常规QC项目包括限制性内切酶酶切分析，残留RNA检测，残留DNA检测，内毒素分析，免费目标基因序列测序，同时金斯瑞还提供精准内毒素含量测定，RNA消除等附加QC服务项目，灵活的选择满足客户的定制化需求。

QC 项目	参考状态	测定方法
超螺旋程度	高级别质粒≥ 90%	琼脂糖凝胶电泳密度测定
内毒素测定	高级别质粒≤ 0.005 EU/µg DNA	TAL 分析
插入序列全长测序	序列准确	Sanger 测序
生物负载测定	48小时无生长	生物负载实验
限制性内切酶分析	与预期大小一致	酶切后凝胶电泳分析
外观	透明，无明显颗粒	视觉观测
A260/280	1.8-2.0	Nanodrop UV值测定
残留RNA	凝胶电泳不可见	琼脂糖凝胶电泳密度扫描
基因组DNA污染	基因组DNA＜质粒条带的15%	GIS灰度分析法
全长测序服务	序列准确	Sanger 测序
Animal free RNA去除	无特定标准值	/
浓度	干粉、液体（默认1mg/mL*，可根据需求调整浓度）	UV测定

* 不同仪器的浓度读数可能在-5%～+15%之间变化。

常规问题解答

1：什么是内毒素，为什么我们要关注质粒中的内毒素残留量？金斯瑞提供了哪些不同的选择？
答：内毒素是存在于细菌如大肠杆菌外膜中的脂多糖或脂聚糖，可以固定膜的完整性和保护细菌本身免受某些压力，维持细菌结构的稳定性。但若制备的质粒中内毒素残留过高，会使其转染细胞的效率降低，同时还可能造成动物或人的免疫反应进而影响基因免疫疗法的实验结果。

2：什么是“控制内毒素流程”和“内毒素去除” ？
答： “控制内毒素流程”是指严格控制在整个实验过程中使用的试剂，材料使其不含内毒素，但不保证细菌裂解过程中细菌本身释放的内毒素。“内毒素去除”是指质粒制备过程中的一个独立步骤，该步骤使用化学试剂去除质粒制备过程中产生的内毒素。

3：金斯瑞制备的质粒其内毒素残留量是多少？
答：金斯瑞提供3种不同的质粒制备服务，不同服务内毒素含量水平也不相同。分子生物学质粒制备未使用内毒素控制流程，但严格控制质粒制备操作手法，能尽可能的减少内毒素的产生。转染级质粒制备可确保内毒素水平≤0.01 EU/µg，代表了当今市场上质粒制备较严格的内毒素质量标准。我们的高通量质粒制备服务使用内毒素控制流程，能确保制备的质粒内毒素水平<0.1 EU/µg，满足细胞转染实验要求。

4：什么是“Animal-free 培养基”？
答：Animal-free 培养基是不含任何动物来源成份的培养基。金斯瑞质粒制备服务均使用Animal-free 培养基。

5：什么是“Animal-free 质粒制备流程”？
答：金斯瑞Animal-free 质粒制备流程中不仅使用Animal-free培养基，同时在质粒制备中不使用牛胰腺 RNase而是使用重组RNase，能确保制备的质粒中没有牛血清白蛋白成分残留。使用Animal-free质粒制备流程制备质粒对避免临床应用和动物研究的安全风险至关重要。

6：为什么质粒的超螺旋占比很重要？
答：多项研究表明，质粒中超螺旋状态的占比是众多下游实验成功的关键。例如，超螺旋可以强烈影响细胞转染效率和影响DNA治疗中副作用的产生概率。超螺旋占比已被认定为预测质粒性能的一项重要指标。