单细胞蛋白质印迹：检测细胞间变异的新方法

细胞间异质性是在多种细胞过程中观察到的常见现象，包括：干细胞分化、发育、癌症、药物功效和免疫反应。研究单细胞行为的传统方法，例如流式细胞术和免疫细胞化学，常常给出不明确的结果，无法突出复杂细胞群中独特且多样化的行为。最近，加州大学伯克利分校的科学家开发了一种新型单细胞蛋白质印迹（scWestern）方法，能够测量细胞间的异质性。该方法可以更好地区分目标信号和脱靶信号，部分原因是抗体探测之前的蛋白质分离步骤。

单细胞蛋白质印迹实验步骤

单细胞蛋白质印迹分析采用涂有薄光活性聚丙烯酰胺（PA）凝胶的显微镜载玻片，该凝胶上有6,720个微孔阵列的微图案。

利用上述方案，科学家研究了单个神经元干细胞内的 MAPK 信号动力学。 当探测磷酸化 ERK1/2（pERK）时，检测到两种不同大小的蛋白质。 据报道，较大的蛋白质（推测为 pERK5）由于序列同源性而与 pERK1/2 抗体发生交叉反应。单细胞蛋白质印迹方法使科学家能够假设这种额外的蛋白质条带是由于脱靶抗体探测造成的，因为 (1) pERK5条带存在显着的细胞间变异性，(2) pERK 和 ERK 抗体荧光信号不相关。 传统的 ICC 和 FC 检测通常无法区分错误的蛋白质信号，这使得单细胞蛋白质印迹成为一种强大的方法，可以提高检测特异性并突出显示对各种刺激的不同细胞反应。

Hughes et al. (July 2014). Single-cell western blotting.Nature Methods.11(7), 749-755.

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