
金斯瑞推出序列100%正确、高纯度的长单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA或single-stranded donor oligonucleotides,ssODN)合成服务,是CRISPR实验中基因插入、置换和修正时,作为同源重组修复(homology directed repair, HDR)模板的绝佳选择,显著提升基因编辑效率和准确性。
依托17年领先的分子生物学技术和全球最大的基因合成平台,金斯瑞ssDNA具备优异稳定的质量、领先的生产周期,是您实验成功率、稳定性和高效性的有力保障。
ssDNA应用于CRISPR Knock-in 实验的流程
ssDNA应用于CRISPR Knock-in实验的原理

ssDNA作为HDR模板在CRISPR Knock-in实验中的优势:
- ✔ 提高编辑效率
- ✔ 提高编辑的准确性
- ✔ 降低脱靶效应
- ✔ 细胞毒性极低
综上,ssDNA非常适合应用于基于CRISPR技术的基因的插入、置换和修正,是原代细胞、干细胞基因编辑、基因改造动物模型建立的理想技术方案。
金斯瑞ssDNA合成服务的优势
纯度高、细胞毒性极低
独家的酶反应制备方法
DNA损伤极小、dsDNA污染极低序列正确性保证
质粒、交付产品经Sanger测序
双重保证100%序列正确率强大的难度序列合成能力
全球最大基因合成平台
领先的难度序列合成能力和质量再次订购价格省、周期快
永久免费存质粒储存
省去基因合成费用与时间
金斯瑞ssDNA合成服务的详情
长度(nt) | 交付量 | 交付物 | QC报告 | 生产周期 * (自然日) |
目录价 |
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151-500 | 3µg | 3-20µg冻干粉 | COA报告 |
20 | 请询价 |
5µg | |||||
10µg | |||||
20µg | |||||
>20µg | 请详询 | ||||
501-3000 | 3µg | 27 | |||
5µg | |||||
10µg | |||||
20µg | |||||
>20µg | 请详询 | ||||
3000~5000 | 请询价 |
*如需要反义链,加收50%费用,周期不变。特殊难度订单需评估周期。
欢迎详询ssDNA合成服务,邮件发送至oligo@genscript.com.cn或拨打电话400-025-8686转5812/5815,专业技术支持为您服务。
1. CRISPR技术进行基因的插入、置换和修正

CRISPR/Cas9技术可在靶位点进行精准的切割,在靶位点产生双链断裂(double stranded breaks, DSBs),引导RNA(single guided RNA, sgRNA)与Cas9蛋白形成复合物后,可以识别靶位点相邻的PAM序列,然后Cas9蛋白可以发挥其核酸内切酶的功能,从而切割并在靶位点产生双链断裂。此时,有两种机制可以触发DNA修复,一种是非同源末端连接(non-homologous end joining, NHEJ),这种方法可能在双链断裂的位点引入突变。另一种机制是同源重组修复(HDR),这种方法通将修复模板中的待敲入DNA片段插入断裂的位点,从而来实现基因中DNA片段的敲入。
传统方法使用双链DNA(double stranded DNA, dsDNA)作为HDR中DNA片段的修复模板,但是最近的研究显示,利用CRISPR技术进行基因插入、置换和修正时,单链DNA(ssDNA或ssOND)是最合适的HDR DNA片段的供体模板。和dsDNA作为供体模板比较,使用ssDNA可以显著提高编辑效率和特异性,并且降低脱靶效应,细胞毒性和随机整合的风险也较之dsDNA大大降低,特别适合原代细胞、干细胞的基因编辑,基因改造动物模型的建立。
2. 体外转录
体外转录法(in vitro transcription , IVT)是在通过采用体外的DNA模板,利用RNA噬菌体聚合酶(T7, T3 或SP6),获得转录产物RNA分子。三种不同类型的DNA模板可以用于IVT,环状质粒形式的DNA、PCR扩增后的DNA片段和单链DNA。转录产物RNA可以用于化学研究、基因学研究、结构研究等多个领域。同时,例如适体、核酶等人工功能性核酸也可以通过IVT的方法得到。
讲座视频:
表明ssDNA作为更优CRISPR 基因编辑模板的文献:
ssDNA与dsDNA比较,可以显著提高编辑效率和特异性,较少脱靶效应,特别适合原代细胞、干细胞的基因编辑,基因改造动物模型的建立。
- "We recently demonstrated that long single-stranded DNAs (ssDNAs) serve as very efficient donors, both for insertion and for gene replacement." Miura H, et al., Easi-CRISPR for creating knock-in and conditional knockout mouse models using long ssDNA donors. Nat Protoc. (2018) 13(1):195-215.
- "We report that targeted chromosomal translocations are generated more efficiently when the all-in-one plasmid, RNP complex, and ssODN-based approaches are used, with the most efficient strategy being the combination of RNP complexes with translocation-ssODNs." Torres-Ruiz, et al., Efficient Recreation of t(11;22) EWSR1-FLI1+ in Human Stem Cells Using CRISPR/Cas9. Stem Cell Reports. (2017) 8: 1408–1420.
- "ssDNA templates have a unique advantage in terms of repair specificity while dsDNA donors can lead to a high rate of off-target integration." Li, et al., Design and specificity of long ssDNA donors for CRISPR-based knock-in. bioRxiv 178905; doi: https://doi.org/10.1101/178905.
- "The PITCh approach required 265 zygotes whereas Easi-CRISPR used only 105 zygotes, and the PITCh approach produced 33% correctly targeted pups, whereas Easi-CRISPR (using ssDNA donors) produced 100% correctly targeted pups." Quadros, et al., Easi-CRISPR: a robust method for one-step generation of mice carrying conditional and insertion alleles using long ssDNA donors and CRISPR ribonucleoproteins. Genome Biology (2017) 18:92.
- "Similar to what has been described with viral HDR templates, we found evidence to suggest that double-stranded templates could integrate independent of target homology, albeit at low rates. These rare events could be reduced almost completely by using single-stranded DNA (ssDNA) templates." Roth, et al., Reprogramming human T cell function and specificity with non-viral genome targeting. Nature 559 (2018) 405–409.