分子生物学
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样品提供说明

菌液：

请您最好提供200μl以上新鲜菌液，装在1.5 ml离心管中并用封口膜封好交给我们的工作人员或快递邮寄，或者提供4ml新鲜菌液，我们可直接进行质粒的提取。

我们的常规培养基为LB，培养温度为37℃，常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液；如果使用特殊抗生素，请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。

平板菌、穿刺菌或者甘油菌：

若您提供平板菌，穿刺菌或甘油菌，请注明培养条件。我们的常规培养基为LB，培养温度为37℃，常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。如您的样品需特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液；如果使用特殊抗生素，请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。提供的平板请用封口膜将其封好交给我们的工作人员，如快递邮寄，请做好缓冲处理，以避免在运输过程中可能出现的损坏。

另外请确保您提供的菌种的准确性，如因菌种自身问题引起的任何测序结果误差，我们将收取全额的测序费用。

质粒：

如果您的质粒纯度可以达到全自动测序的要求，即：OD260/OD280=1.6~2.0，也可以直接提供质粒。要求浓度要求>200ng/μl，提供10μl 以上。

我们的常规培养基为LB，培养温度为37℃，常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液；如果使用特殊抗生素，请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。除此之外，您还可以提供平板菌、穿刺菌或者甘油菌。以下情况请您直接提供抽提好的DNA模板：

  • 噬菌体DNA
  • 低拷贝质粒
  • cosmid,BAC DNA

请您纯化DNA模板时注意：纯化的DNA模板要求纯度高。纯化以后的DNA模板要溶解于无菌去离子水。浓度要求>200ng/μl，（载体较大的，请提供>500ng/μl），提供10μl以上（一般情况下，经测序部检测合格后才可使用）。

无论您按照1或2提供菌液或质粒，请您务必写明：
  • 质粒的名称和详细图谱
  • 插入片段的大小和酶切位点
  • 选取的测序引物名称和序列，并且标明测序引物距离插入片段的位置（注：测序引物以后可能会有20~30个碱基不明晰）
  • 如果提供特殊测序引物，请写明序列，并且一定要提供经PAGE纯化的引物，浓度大于5pmol/μl

PCR产物：

如果您提供的是PCR原液，我们将进行琼脂糖凝胶电泳纯化。回收后的产物无论测序成功与否，我们将收取一定的纯化费用，所以请您提供PCR原液时一定要进行鉴定。确信PCR产物为单一扩增条带，总量必须大于2μg，方可提供，以免耽搁您的实验。

如果您提供纯化好的PCR产物，条带必须单一，纯度OD260/OD280=1.6~2.0。最好溶解在已灭菌的去离子水中，浓度要求>50 ng/μl，提供10μl以上。同时请您提供PCR引物，并注明浓度，一定要提供经PAGE纯化的引物，浓度大于5pmol/μl。

注意事项：
  • PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度，所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近，用电泳胶也无法分开，此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
  • PCR产物直接测序成功的另一要因是引物，不能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高，引物的3’端必须与模板完全匹配，含有Mix碱基的引物一般不能测序（特别是3’端）。此外，测序引物长度一般为20个碱基左右，GC含量必须在50~60%左右。而且用于测序的引物一定要经过PAGE纯化，纯度必须大于90%。
  • 在PCR扩增时，难以扩增（扩增后的PCR带较弱）的PCR产物在测序时一般成功率较低。
  • 小于150bp的PCR产物直接测序效果不好，建议克隆后测序。

注：以下电泳图片均为2微升上样量。

  1. PCR未纯化产物，如下图：
DNA测序
  1. PCR纯化产物，如下图：
DNA测序
  1. 质粒，如下图：
DNA测序

Cosmid中插入DNA片段的测序：

请提供至少5 μg纯化后的Cosmid DNA（因每个反应的用量需1 μg以上），并注明浓度。同时提供浓度大于5 pmol/μl的引物10 μl以上（浓度必须正确）。

其它说明：

客户在提供测序样品的同时，请注明用何种引物，测几个反应，是否测通，是单链测序还是双链测序等。

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