CRISPR SaCas9 constructs

SaCas9质粒构建

SaCas9是来源于Staphylococcus aureus的Cas9核酸酶,与SpCas9具有相似的DNA切割效率;而SaCas9结构更小,比SpCas9小25%,使得AAV Cas9包装成为可能。SaCas9最主要的优点在腺相关病毒(AAV)包装中:AAV的包载大小约为4.5 kb,包装SpCas9到载体中有一定的困难(Ran et al, 2015)。由于构建的SaCas9质粒具有更低的免疫原性,因此SaCa9更适用于体内基因编辑的应用,如治疗。与其它Cas9异构体核酸酶相同,SaCas9的另一大优势是特异性强。SaCas9酶能够识别更长的PAM序列,识别位点为NGRRT或NGRRN。由于具有更长的序列长度,这个PAM序列在基因中出现的频率更低,大约每32 bp中出现一次,而NGG约每8 bp中出现一次(Kleinstiver et al, 2015)。使用SaCas9质粒载体,建议gRNA的长度为21-23 bp。对于AAV包装,pAAV血清型包装质粒和pDF6辅助质粒也是必需的。

SaCas9 all-in-one载体

金斯瑞目前提供all-in-one AAV载体用于SaCas9质粒构建:

Vector type Vector Name gRNA promoter All-in-one vector? Selection/Screening
Markers
Vector Map Vector Price
AAV PX601 U6 Yes
Driven by CMV
promoter with N-terminal NLS
AmpR PX601 vector map quote,
10 business day turnaround

服务交付

注:如需制备其它规格或转染级的质粒,需额外收费,详情可查看金斯瑞质粒DNA制备服务

参考文献


客户应明确知晓上述对试剂用途的限制,并自行承担因违反该限制而产生的法律责任。


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