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酵母蛋白表达服务

金斯瑞酵母蛋白表达系统结合了原核和真核蛋白表达系统的优点，是大规模生产重组真核蛋白的最佳模式。我们的酵母蛋白表达系统集高产量、高效和类似哺乳动物表达系统的特点为一体，蛋白表达持久、稳定。金斯瑞可制备与哺乳细胞系统性质相同的表达蛋白，利用基因改造型酵母使表达的蛋白糖基化，表达的蛋白在人体治疗中具有很强的适应性。此外，该表达系统可稳定的表达那些在其它表达系统中无法表达的蛋白。

另外，作为中国最大的基因合成供应商，金斯瑞根据Pichia pastoris，Saccharomyces cerevisiae及其它酵母菌株的密码子偏爱性，免费提供给您最佳高级密码子。您还可以免费使用我们的稀有密码子分析软件，测试您的基因序列是否理想，是否需要优化，以提高您的目的蛋白表达水平。

酵母表达蛋白的应用：

真核蛋白分析
核磁共振法研究同位素标记蛋白
检测筛选
结构生物学研究
动物饲料生产
环境工程

YeastHIGH^TM 蛋白表达套餐
标准蛋白表达套餐
示例
优势

YeastHIGH^TM蛋白表达套餐 (SC1346)

金斯瑞engineering-enhanced蛋白表达技术，可将大部分的重组蛋白表达成功率提高至90%以上，专利的YeastHIGH^TM技术能更高的提升表达率。很多原核表达的分泌型蛋白会出现不溶，或包涵体无活性等情况，选择酵母表达系统则可避免这些问题，成功表达蛋白。

主要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	亚克隆至两个适当的表达载体中制备大量质粒构建线性化载体	载体构建报告	2周
2.表达优化及评估	将线性载体转化至适合的寄主菌株中通过PCR方法确定阳性转化株表达优化及确认 YeastFast技术帮助插入复杂基因片段，转化筛选确定培养基及诱导浓度 SDS-PAGE以及Western blot分析	表达报告	3–5周
3.蛋白表达及纯化	1L系统中少量表达一步法纯化，或附加纯化至纯度最低可达90%	已纯化可溶性蛋白 QC 文件	2周
4.大规模蛋白制备及纯化 (可选择)	高达500L的大规模表达（使用发酵桶以及TFF大规模过滤系统）交付的蛋白纯度高达90%及以上标签去除	酵母胞浆/已纯化的蛋白 QC文件	2–3周

标准蛋白表达套餐(SC1257)

金斯瑞可提供给客户标准的酵母表达套餐，该套餐可适当修改，以满足客户的需求。

重要步骤	特点	交付内容	交付时间
1.亚克隆	亚克隆至适当的表达载体制备大量质粒构建线性化载体	载体构建报告	2周
2.表达及评估	将构建好的线性化载体转入合适的寄主菌株中通过PCR方法确定阳性转化株表达确认 SDS-PAGE以及Western blot分析	表达资料	2周
3.少量表达及纯化	1L酵母培养物表达一步法纯化，或附加纯化至纯度最低可达90%	已纯化的蛋白 QC报告	2周
4.大规模蛋白制备及纯化 (可选择)	高达500L的大规模表达（使用发酵桶以及TFF大规模过滤系统）交付的蛋白纯度高达90%及以上标签去除	酵母胞浆/已纯化的蛋白 QC报告	2–3周

*注：表中的交付时间是金斯瑞标准服务交付时间，如果您还需要额外的服务，可能需适当延长服务时间。

1.酵母系统表达蛋白

金斯瑞YeastHIGH^TM表达系统以及YeastFast技术在分泌表达方面具有很强的优势。下图所示为使用金斯瑞YeastHIGH^TM表达技术表达一种酶。SP-Sepharose一步法纯化后，产生了表达水平约20mg/L的无标签蛋白，且纯度高于90%。金斯瑞将通过MALDI-TOF方法进一步检测目标蛋白。

Fig. A: Expression and secretion of target protein from P.pastoris
         Lane 1 : Conventinal yeast expression technology
         Lane 2 : GenScript YeastHIGHTM technology
         Lane 3 : Negative control
         Fig.B: Purification of the target protein by SP-Sepharose
         Lane M: Smart Protein Standard (GenScript, Cat. No. MM0900)

2.信号肽

下图所示为一种信号肽蛋白酶的表达情况。使用Saccharomyces cerevisiaeα factor prepro peptide（α因子前体肽原）表达，无法表达目的蛋白。然而，将α因子前体肽原序列更换为蛋白酶信号肽自身序列时，酵母成功分泌了目的蛋白，目的蛋白正确表达。

Fig.A: Western blot analysis of target protein expression with native signal peptide
           Lane 1-5: Induced for 24 h, 48 h, 72 h, 84 h, 120 h
           Fig.B: Western blot analysis of target protein expression with α factor prepro peptide
           Lane 1-4: Induced for 24 h, 48 h, 72 h, 84h
           Lane M: Protein Marker

1. YeastHIGH^TM Technology技术：

金斯瑞YeastHIGH^TM技术是酵母表达的最强的优势，包括启动子，最佳的载体细胞，可诱导性，信号肽以及细胞定位，是我们能提供客户高水平的重组蛋白制备的最佳保障。在我们提供酵母蛋白表达服务的这些年，我们已成功表达了数百种蛋白，包括酶，蛋白酶，激酶，细胞因子，受体，及转录因子等。

2. OptimumGene^TM密码子优化技术提高表达水平：

金斯瑞先进的OptimumGene^TM密码子优化技术能优化您的基因序列，有效提高表达水平和蛋白溶解性。OptimumGene^TM 运算法则可优化与转录，翻译以及蛋白折叠复性相关的很多参数。 More…

3.大规模蛋白制备

金斯瑞发酵设备提供给您高质量的蛋白制备，最高可提供500L。我们的TFF大规模过滤系统能够有效提高蛋白纯度以及产量。

4.纯化

金斯瑞为您提供灵活多样的纯化系统：亲和柱、凝胶过滤、离子交换、HIC(疏水相互作用色谱法)以及HPLC。蛋白中插入各种不同的标签，以促进纯化，实验结束后，金斯瑞同样提供您标签去除服务。

5.价格实惠

复杂的酵母表达系统价格优惠，极具竞争性，金斯瑞帮您有效节省实验经费。

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