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金斯瑞CloneEZ®重组克隆试剂盒成功解决了PCR产物酶切带来的各种难题，实现了PCR产物不经过酶切直接克隆入载体！CloneEZ®重组克隆试剂盒操作非常方便，根据酶切后线性化载体的两端序列，分别在PCR的两条引物的5’端加上15 base与载体末端同源的序列，PCR扩增的产物两端就会分别带有15 bp与线性化载体两端相同的序列。PCR产物和线性化载体与CloneEZ®专利酶充分混匀，22 ℃温浴30 min后按传统方法转化E. coli competent cells，就可以高效、定向地将PCR产物克隆到目标载体上（图1）。
在有些PCR产物克隆中，载体需要双酶切，其中一个酶切位点非常罕有，内切酶很昂贵或很难购买到，或者实验室中恰好双酶切中其中一个酶恰好用完而且购买需要很长时间，而这些又都是实验所必需的，从而使后续的克隆工作难以快速顺利完成。如果在载体上两个酶切位点相距＜100 bp，使用金斯瑞CloneEZ®可以只单酶切克隆即可，完全可以得到双酶切克隆的结果，两个酶切位点间的多余序列会彻底去无踪（图2），克隆效率只会稍微地降低而已！
金斯瑞CloneEZ®重组克隆试剂盒所克隆的片段可以来自PCR扩增产物，也可以来自酶切产物，但载体和片段末端的15 bp同源序列是必需的。对于较长的DNA片段（＞8 kb），可通过分段扩增，分步精确定向克隆到载体中，灵活地化解了长片段很难一步克隆的难题（图3）。对于＜4 kb DNA片段，CloneEZ®重组克隆通常具有85%以上的重组效率（图4）。 |
