服务平台简介

金斯瑞蓬勃生物可提供标准型和深度型两种亲和力成熟服务套餐,满足您不同的亲和力成熟需求。

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抗体亲和力成熟标准型服务

Trimer引物;避免密码子偏移、移码突变和控制终止密码子的掺入

标准型服务方案通过构建Trimer组合突变文并用噬菌体展示技术筛选,可在12-14周交付满意的纯化抗体,保证亲和力提升5倍

MOE同源建模
Trimer组合文库构建
基于噬菌体展示的
淘选与筛选
抗体生产与验证

MOE同源建模平台

  • 在抗体研发中往往通过突变CDR区来提高抗体和抗原的亲和力,基于抗原抗体复合物或抗体结构,通过计算机模拟的方法指导抗体优化,从而提升抗体抗原的亲和力。

    MOE软件通过直接链接RCSB/PDB数据库,并且包括十几个经典蛋白家族结构数据库(如转运蛋白家族,GPCR家族蛋白激酶等),从而高效的进行抗体的结构模拟。

Trimer组合突变文库

Trimer引物是3个核苷按预定种类和顺序连接起来所形成的三联核苷(Trimer phosphoramidites),每个trimer对应特定的氨基酸。由Trimer引物构建的突变文库可避免密码子偏移、移码突变和控制终止密码子的掺入等问题,突变文库的覆盖度高,均一性好。

Trimer组合突变文库 VS NNK组合文库

NNK文库 Trimer突变库
覆盖度和均一度
引物类型 简并引物 Trimer引物
密码子种类 32种 20种
氨基酸种类 随机 可定制
非预期密码子
终止密码子 1 0
密码子优化 不支持 不支持
价格
  • NNK文库:

    使用单一核苷合成的引物在突变位点处会不可避免的产生冗余突变和终止密码子,产生截断产物,氨基酸比例分布均一性差,后期筛选极大概率丢失高质量突变体。

  • VS
  • Trimer文库

    基于trimer引物在被突变序列的任意位置引入全部20个氨基酸的混合物,可避免密码子偏移、移码突变和控制终止密码子的掺入等问题,文库的均一性和覆盖性更高。

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抗体亲和力成熟深度型服务

半导体精准引物池;精准点饱和突变+组合突变文库;穷举突变可能性

深度型服务方案先通过由半导体精准引物池构建的精准点饱和突变库(Precise Site-Saturation Mutagenesis Library,PML)穷举了所有突变的可能性,从而挑选出关键核心位点,再构建组合突变库进一步筛选可能的最优突变体,该过程利用金斯瑞蓬勃生物特色的FASEBA高通量筛选平台,提高了筛选的准确度和精准度。该深度型服务可以在14-16周内交付亲和力提升10倍及以上的优化抗体。

MOE同源建模
精准点饱和突变库
(PML) 构建
FASEBA 筛选及SPR
亲和力排序
组合突变文库构建及
SPR亲和力排序
抗体生产与验证

精准点饱和突变文库(Precise Site-Saturation Mutagenesis Library,PML)平台

PML是一种饱和突变文库,每一个氨基酸都会被突变成其他19个氨基酸,且概率分布相同。通过对PML的筛选,我们会识别出3-5个突变热点。然后根据这些热点,我们将构建一个组合突变库,以找到组合突变库中3-5个具有亲和力的组合。这种方法可以提高筛选效率,增加获得高亲和力序列的概率。

通过 chip oligo构建PML,实现突变氨基酸的100%覆盖率

parental

通过NGS对PML测序,验证各突变位点的突变分布情况

parental

与传统NNK文库比较,PML具有明显优势

PML NNK文库
覆盖度
引物类型 通过芯片构建引物文库 简并引物
密码子种类 可定制 随机
氨基酸种类 可定制 随机
非预期密码子
密码子优化 支持 不支持
  • NNK文库:

    ✔ 氨基酸随机突变,突变覆盖率低,突变文库的多样性低,后期需要大量的筛选工作,降低工作效率

  • VS
  • PML

    ✔ 饱和突变文库,NGS测序确保18(不含半胱氨酸C)种突变氨基酸均匀分布,且仅含所需要的突变序列

    ✔ 后续筛选成功率高

    ✔ 可根据客户需求定制化设计突变文库

FASEBA高通量筛选平台

FASEBA(Fast Screening for Expression, Biophysical-properties and Affinity)是一个基于大肠杆菌的专利系统,在原核表达上清层面即可完成基于Biacore的ranking验证,大幅降低了重组表达的成本及周期,从而显著提升改造成功率。

  • FA   Fast

    S     Screening of

    E     Expression

    B     Biophysical-properties and

    A     Affinity

    FASEBA高通量筛选技术可以快速从大量候选蛋白中筛选出亲和力高、表达量高、生物物理性质好的分子

服务内容

里程碑 描述 周期 交付
1 亲代抗体产生和结合确认 12-14周
  • 所有优化后的抗体序列
  • 交付3个纯化抗体(0.5 mg/Ab)
  • 一个序列达到亲和力5倍及以上提升
2 Trimer组合文库构建
3 噬菌体淘选和筛选
4 亲和力成熟抗体的生产和表征
里程碑 描述 周期 交付
1 亲代抗体产生和结合确认 14-16周
  • 所有优化后的抗体序列
  • 交付3个纯化抗体(0.5 mg/Ab)
  • 一个序列达到亲和力10倍及以上提升
2 PML构建和FASEBA筛选
3 组合库构建与筛选
4 亲和成熟抗体的产生和鉴定(最多3个)

案例分析

Ligand Analyte Chi² (RU²) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) Rmax (RU)
WT Target C 1.33E+00 3.79E+05 2.53E-01 6.66E-07 162.9
variant1 Target C 5.37E-02 3.77E+05 5.50E-04 1.46E-09 45.3
variant2 Target C 8.22E-02 5.87E+05 3.74E-04 6.38E-10 50.5
variant3 Target C 3.76E-02 4.92E+05 2.49E-04 5.06E-10 49.9
Case Studies1
Ligand Analyte Chi² (RU²) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) Rmax (RU)
Target B WT 7.96E-01 1.40E+05 1.16E-04 8.29E-10 64.7
Target B variant 1 7.60E-01 1.97E+05 3.73E-05 1.90E-10 38.8
Target B variant 2 1.23E+00 1.97E+05 1.00E-06 5.08E-12 51.3
Target B variant 3 4.36E-01 1.52E+05 1.67E-05 1.09E-10 39.7
  • Case Studies1
  • Case Studies2
  • Case Studies3
  • Case Studies3

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